菌物学报

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吴玲,胡小倩,楼兵干,陈乾,林钗

菌物学报. 2009, 28(6): 765-768.

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多花筋骨草是一种在江南广泛栽培的园艺植物，2005年秋，在杭州西湖风景区发现其黑胫病。该病害一年四季均可发生，发病最严重的是花期。黑胫病首先在寄主下部叶片的叶柄处发病，病斑初期为褐色、水渍状，很快变黑，最后整株枯萎死亡，典型症状是胫基部变黑腐烂。通过对病原菌形态学观察与核糖体DNA ITS序列分析，侵染多花筋骨草的6个分离菌株均被鉴定为多喙茎点霉Phoma multirostrata。致病性试验表明，多花筋骨草是多喙茎点霉的寄主。

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正己醇降解菌的分离、筛选及分类鉴定

令桢民,师俊玲,杨保伟

菌物学报. 2009, 28(6): 769-775.

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为获得可降解正己醇的真菌菌种，分别以苹果园土壤、苹果渣、苹果酒醪和醋醅为分离源，采用富集培养和紫外线定向诱变，得到了两株能在pH3.8-4.0的条件下降解正己醇的真菌菌株TF和TM。菌株TM和TF在马铃薯葡萄糖培养液中对4.0mg/mL正己醇的降解率分别为45.60±5.43%和23.82±9.27%，与对照在α=0.01水平上差异显著。结合形态学特征及26S rDNA D1/D2区（菌株TM）和ITS区（菌株TF）序列分析，对两株菌进行了分类鉴定。结果表明：菌株TM属于地霉属 Geotrichum，菌株TF为白地霉Geotrichum candidum（有性型Galactomyces geotrichum）。

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雀麦上雀麦腥黑粉菌Tilletia bromi的分子检测

廖芳,赵磊,罗加凤,黄国明,刘跃庭,李明刚

菌物学报. 2009, 28(6): 776-782.

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雀麦是重要的牧草，近年来进口量激增。寄生于雀麦上的腥黑粉菌共有4种，即小麦矮腥黑穗菌Tilletia controversa（TCK）、雀麦腥黑粉菌T. bromi、T. bolayi和小麦网腥黑穗菌T. caries（TCT），根据冬孢子形态难以直接区分这些种类。本文在形态、自发荧光和萌发生理三方面的比较研究基础上，依据beta-微管蛋白tub2基因序列设计一套引物，转化为特异SCAR分子标记，建立了雀麦上T. bromi的菌丝基因组DNA的特异PCR检测方法和冬孢子的套式特异PCR检测方法，为病害提供了快速、可靠的检测方法。

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干旱持续时间对内蒙古草原中坚韧胶衣和分指地卷固氮活性的影响

刘华杰,房世波,吴清凤

菌物学报. 2009, 28(6): 783-789.

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坚韧胶衣Collema tenax和分指地卷Peltigera didactyla是分布于我国北方干旱和半干旱草原中的两种固氮地衣，对生态系统氮素循环具有重要影响，其生理活性对土壤水分条件比较敏感。目前，干旱持续时间对该区域中地衣固氮活性的影响尚不清楚。本文调查了一个克氏针茅Stipa krylovii草原生态系统中坚韧胶衣和分指地卷的盖度，采用乙炔还原法研究了不同干旱持续时间（分别为0、1、2、4、8和16d）对两种地衣固氮活性的影响。结果表明，坚韧胶衣盖度（3.26 ± 1.24%）显著高于分指地卷（0.02 ± 0.07%）（p< 0.01）；在绝大多数干旱持续时间处理下，两种地衣之间的固氮活性差异并不显著，且均随干旱持续时间延长而呈S形下降。不超过2d的干旱时间并不引起地衣固氮活性的显著变化，4d的干旱时间导致坚韧胶衣和分指地卷固氮活性分别下降了34%和54%，干旱持续8d导致两种地衣固氮活性降幅达90%，16d的干旱使二者降幅均超过99%。表明干旱对坚韧胶衣和分指地卷固氮活性的抑制作用随干旱持续时间的延长而增强。干旱对地衣固氮作用的负效应可能与地衣体内光合产物和能量水平、复水至表达固氮活性之间的延迟时间和达到最高固氮活性的延迟时间有关。

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荒漠地衣糙聚盘衣共生菌耐旱生物学研究及液体优化培养

曹叔楠,魏江春

菌物学报. 2009, 28(6): 790-796.

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为从荒漠地衣共生菌中筛选耐旱基因，以分离自荒漠地衣糙聚盘衣Glypholecia scabra的共生菌为实验材料，研究了在水分胁迫条件下其耐旱生物学特性的变化情况。结果显示：在低水分活度条件下，糙聚盘衣共生菌通过积累可溶性糖含量维持细胞渗透压，通过增加抗氧化物质多酚及还原型谷胱甘肽的含量清除活性氧物质。初步推测与多酚和还原型谷胱甘肽代谢相关基因为耐旱基因的候选基因，在水分活度aw=0.90，aw=0.85时，可以诱导候选基因大量表达。此外，为给克隆与表达分析耐旱基因提供足够菌种，通过Plackett-Barman实验和正交实验对其培养条件进行了优化。其最佳液体培养基为：土豆浸汁1L，葡萄糖15g，大豆蛋白胨2g，钴胺素（VB12）200μg；最佳培养条件为：温度18℃，pH 6.3，装瓶量150mL/250mL，摇床转速为100r/min。糙聚盘衣共生菌生长曲线显示，通过优化培养条件可使其生物量显著提高。

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双孢蘑菇耐热相关基因的表达载体构建及转化研究

陈美元,廖剑华,郭仲杰,李洪荣,卢政辉,蔡丹凤,王泽生

菌物学报. 2009, 28(6): 797-801.

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构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus耐热相关基因028-1全长cDNA序列的双元表达载体，通过农杆菌介导转化双孢蘑菇非耐热菌株8213，经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定，获得了一批双孢蘑菇转基因菌株。对10株转基因菌株进行了不同温度下的草管走菌试验，结果显示大部分转基因菌株的耐热性能有较为明显的提高。

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灵芝子实体原基双向电泳和总蛋白质提取方法的建立

刘晓云,苏明声,杨俊璋,谢小梅

菌物学报. 2009, 28(6): 802-805.

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比较了Tris-饱和酚法和三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法对灵芝子实体原基总蛋白质的提取效果。用Image Master 2D Platinum 6.0软件分析两种方法所提蛋白质的双向电泳图谱，分别得到565和273个蛋白质点；（TCA）/丙酮沉淀法在碱性端低分子量区域有些蛋白质斑点存在拖尾现象，Tris-饱和酚法能有效去除样品中的盐分，使蛋白质的聚焦效果更好，蛋白点数增加。Tris-饱和酚法可做为灵芝子实体原基总蛋白质的提取方法并为其他药用真菌总蛋白质的提取提供参考，同时为本实验室后续研究灵芝双向性固体发酵雷公藤的蛋白差异表达奠定了基础。

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实时荧光定量PCR检测球孢白僵菌热休克蛋白基因hsp70在几种胁迫条件下的表达

谢翎,陈红梅,汤强,蒲顺昌,李增智,黄勃

菌物学报. 2009, 28(6): 806-812.

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本研究运用Realtime-PCR技术，对球孢白僵菌Beauveria bassiana hsp70基因在不同胁迫条件下的表达情况进行了检测。从mRNA转录水平探讨了不同胁迫条件对球孢白僵菌hsp70基因表达的影响。结果表明：38℃高温胁迫下，30min时表达量达到最高峰，为对照样品的10.18倍。随后表达量开始下降，至180min时，其表达量降为最低，为对照样品的2.85倍；4℃低温胁迫下，2h检测到hsp70的表达量下降至最低点，为对照样品的0.25倍。随后表达量开始回升，至10h表达量始终维持在对照样品的1.4－1.5倍左右；紫外胁迫下（波长253.7nm），3min后 hsp70的表达量快速上升至最高峰，为对照样品的2.33倍。随后表达量迅速下降，至60min表达量始终维持在对照样品的0.2倍左右。因此推测，hsp70基因在球孢白僵菌抵抗高温、低温和紫外三种胁迫方面都可能具有重要作用。同时研究结果也表明，球孢白僵菌hsp70基因启动子在逆境下可引导基因高效表达，因而在抗逆工程菌株构建方面可能具有重要的应用价值。

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毛木耳子实体中活性多糖APPⅡA的分离纯化与结构初探

清源,余梦瑶,罗霞,江南,郑林用,葛绍荣

菌物学报. 2009, 28(6): 813-818.

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毛木耳Auricularia polytricha子实体500g经热水浸提、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白后，得到粗多糖3.94g，得率为0.79%。经小鼠S180载体实验证实，50mg/kg该粗多糖对肿瘤的抑制率达47.89%，呈极显著差异。利用离子交换柱对其进行分离，共得到三个部分，分别命名为APPⅠ、APPⅡ、APPⅢ。其中，APPⅡ对小鼠S180的抑制率达到56.36%，明显优于其他两部分。通过Sephacryl S300凝胶过滤层析柱后，APPⅡ被进一步分离为A和B两个部分，APPⅡA的抑瘤率为53.61%，远高于APPⅡB，呈极显著差异。通过紫外光谱、红外光谱等方法对该单一多糖组分进行结构分析，表明APPⅡA为一相对分子质量约为110,000Da、可能同时具有α和β构象的杂多糖，主要有木糖和甘露糖组成，且纯度较高，含有硫酸基。

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斜生褐孔菌多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

安晓丽,赵敏,董露璐,何平平,相文华

菌物学报. 2009, 28(6): 819-824.

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研究了斜生褐孔菌多糖对人类肝癌HepG-2细胞凋亡的诱导作用。采用噻唑蓝法（MTT法）观察了斜生褐孔菌多糖对HepG-2细胞生长的影响，用透射电镜观察了细胞形态，用DNA Ladder检测了细胞凋亡，用流式细胞仪检测了细胞凋亡率；同时采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR法）研究了不同浓度斜生褐孔菌多糖作用后HepG-2细胞中Bax和Bcl-2基因mRNA转录水平的变化。结果表明斜生褐孔菌多糖能抑制HepG-2细胞增殖，并呈时间剂量依赖关系；电镜观察、DNA Ladder和流式细胞仪检测均证实了斜生褐孔菌多糖能够诱导HepG-2细胞凋亡；经斜生褐孔菌多糖处理后，HepG-2细胞中Bax基因 mRNA转录水平增强，而Bcl-2 基因mRNA无明显变化。证明了斜生褐孔菌多糖具有抑制HepG-2细胞生长及诱导HepG-2细胞凋亡的作用，这可能与调节Bcl-2和Bax基因表达水平有关。

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响应曲面法优化灵芝廉价型深层发酵培养基的研究

刘高强,王晓玲,韩文军,王卫

菌物学报. 2009, 28(6): 825-831.

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为了获得生产用廉价型灵芝发酵培养基，采用中心组合旋转设计法和响应曲面法对低成本培养基组分进行了优化。优化的四个组分为玉米粉（x1）、麸皮粉（x2）、豆饼粉（x3）和蔗糖（x4）。结果表明，灵芝菌体发酵和多糖发酵的培养基预测模型分别为：Y1 = 15.1 – 0.31x1　– 0.34x2 + 0.36x3 – 0.44x4 –1.26x12 – 1.98x22 – 0.85x32 – 1.15x42 – 0.59x2x3和Y2 = 2.0 – 0.08x1　– 0.08x2 + 0.04x3 – 0.09x4 – 1.13x12 – 0.33x22 – 0.08x32 – 0.16x42 – 0.16x2x3 – 0.10x1x4。从中获得菌体发酵的最优配方为：玉米粉19.7g/L，麸皮粉11.3g/L，豆饼粉6.3g/L，蔗糖19.5g/L；多糖发酵的最优配方为：玉米粉19.6g/L，麸皮粉11.0g/L，豆饼粉6.7g/L，蔗糖19.1g/L。150L发酵罐中试放大结果表明，灵芝菌体的产量为16.92g/L，多糖产量为1.86g/L。所得培养基为灵芝产品的高效低成本生产提供了基础。

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灵芝发酵液酸性醇提物抗慢性支气管炎疗效的研究

赵世光,王林

菌物学报. 2009, 28(6): 832-837.

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通过灵芝发酵液酸性醇提物对小鼠的镇咳、祛痰实验，及烟熏小鼠肺部组织的形态学观察，研究灵芝酸性醇提物抗慢性支气管炎的疗效。灵芝发酵全液，不同剂量的灵芝酸乙醇提取物、灵芝酸正丁醇提取物均能显著延长二氧化硫诱发的小鼠咳嗽潜伏期，并显著抑制小鼠咳嗽次数，有明显的镇咳作用。60mg/kg给药量的正丁醇提取物使小鼠气道酚红排泄量较对照组提高了50.7%，祛痰疗效也明显优于双黄连口服液。肺组织切片病理检查表明，灵芝酸性提取物明显减轻烟熏小鼠的气管、支气管粘膜损伤，慢性支气管炎的组织病理学变化明显轻于单纯烟熏模型组，且抗炎、抗损伤作用与双黄连相当，这可为灵芝酸产品的研究开发提供一定的药理依据。

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紫芝酸性三萜类化合物体外抑癌和抑菌作用的研究

王晓玲,刘高强,周国英,赵艳,李杜

菌物学报. 2009, 28(6): 838-845.

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采用噻唑蓝比色（MTT）法研究紫芝酸性三萜对几种癌细胞体外增殖的影响，并用管碟法检测了紫芝胞内酸性三萜对几种细菌和霉菌的体外抑菌作用。结果表明，紫芝胞内酸性三萜和胞外酸性三萜在250μg/mL时，对人肝癌细胞BEL7402和人乳腺癌细胞MCF-7均有显著抑制作用（P < 0.05），但对人胃癌细胞SGC-7901没有显著抑制作用（P > 0.05）。BEL7402细胞的生长曲线试验表明，胞内酸性三萜组的细胞受到显著抑制，未出现指数增长期，且BEL7402细胞培养3d后，对照组细胞数目多、均匀，而胞内酸性三萜组的细胞数目明显减少，且细胞变小。抑菌试验结果表明，胞内酸性三萜在40mg/mL时，对大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的生长均具有显著抑制作用（P < 0.01），对枯草芽孢杆菌Bacillus subtitis和青霉的Penicillium chrysogenum抑制作用较弱；而在此浓度下对黑曲霉Aspergillus niger没有抑制作用。该样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和青霉的MIC分别为20mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、80mg/mL和40mg/mL。此外，该酸性三萜的抑菌成分在60℃下（处理2h）较稳定，但在80℃以上，热稳定性较差，活性降低。

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南极地衣提取物抗氧化能力的初步研究

韩乐琳,魏江春

菌物学报. 2009, 28(6): 846-849.

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本文讨论4种南极地衣簇花石萝Usnea aurantiacoatra，南极石萝Usnea antarctica，粉球衣Sphaerophorus globosus及一种石蕊Cladonia sp.甲醇提取物的体外抗氧化能力；采用亚油酸氧化体系、二苯代苦味酰自由基体系、还原力实验对其抗氧化活性进行测定，并同维生素C、丁基甲氧基苯酚进行比较。结果显示供试南极地衣均具有较高的抗氧化活性，且呈剂量依赖关系；其中，簇花石萝的脂质过氧化抑制率最高，还原力最大；石蕊的二苯代苦味酰自由基清除能力最大。此外，从簇花石萝中提取的松萝酸具有一定的抗氧化活性，但明显低于簇花石萝粗提物。

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微紫青霉菌Penicillium janthinellum菌株GXCR吸附废水中Cd2+的研究

黄晓婷,马义丽,李有志

菌物学报. 2009, 28(6): 850-856.

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研究了5种不同预处理方式对丝状真菌微紫青霉菌Penicillium janthinellum菌株 GXCR的Cd2+吸附的影响。结果表明，高温（80℃）、去离子水中的匀浆化、匀浆+碱化（NaOH，0.5mol/L）（简称匀浆碱化）和匀浆+30%二甲基亚砜处理均能提高菌体的吸附率，其中匀浆碱化处理后菌体的吸附效果最佳，吸附增量达到117.96%；匀浆+酸化（H2SO4， 0.5mol/L）处理则导致菌体的Cd2+吸附能力显著下降。匀浆碱化菌体吸附符合典型的Langmuir方程，表明该菌对Cd2+的吸附可能是以表面吸附为主的吸附行为。在吸附-解吸附循环4次后匀浆碱化菌体的Cd2+的吸附效率为58.01%。红外光谱分析显示匀浆碱化处理主要影响菌体表面分子的–OH和C=O基团，其中与Cd2+结合的主要基团是–OH。结果也表明，匀浆碱化菌体具有处理电镀废水的潜能。

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无丝盘菌属--中国无丝盘菌纲一新记录属

陈今朝,图力古尔

菌物学报. 2009, 28(6): 857-859.

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木霉属中国新记录种

贾东晨,余泽芬,乔敏,张克勤

菌物学报. 2009, 28(6): 860-862.

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单孢节丛孢--中国新记录种

张金莲,刘斌,蔡杰华,黎金锋

菌物学报. 2009, 28(6): 863-864.

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Monosporascus cannonballus在海洋环境中的发现

金静,黄金光

菌物学报. 2009, 28(6): 865-869.

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白灵侧耳不亲和性因子分析

黄晨阳,曲绍轩,高巍,陈强,张金霞

菌物学报. 2009, 28(6): 870-872.

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尖顶羊肚菌活性提取物降血脂作用的研究

殷伟伟,张松,吴金凤

菌物学报. 2009, 28(6): 873-877.

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真菌生命之树项目（Assembling the Fungal Tree of Life）和美国真菌系统学研究现状

王征,戴玉成

菌物学报. 2009, 28(6): 878-887.

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深色有隔内生真菌（DSE）研究进展

刘茂军,张兴涛,赵之伟

菌物学报. 2009, 28(6): 888-894.

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兰科植物与真菌共生关系研究方法及其应用

姜鹏,范黎

菌物学报. 2009, 28(6): 895-901.

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