野生桑树桑黄和杨树桑黄化学成分及抗氧化活性比较
浙江省农业科学院园艺研究所 浙江 杭州 310021
Comparative study of chemical components and antioxidant activities of wild Sanghuangporus sanghuang and Sanghuangporus vaninii
Institute of Horticulture, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou, Zhejiang 310021, China
责任编辑: 王敏
收稿日期: 2020-12-15 接受日期: 2021-01-7
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Corresponding authors:
Received: 2020-12-15 Accepted: 2021-01-7
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比较了野生桑树桑黄和杨树桑黄子实体乙醇提取物抗氧化活性和化学成分的差异,探讨其高抗氧化能力的来源。以二苯基三硝基苯肼自由基(DPPH)清除率、超氧阴离子清除率和β-胡萝卜素漂白实验作为抗氧化的指标比较其抗氧化活性差异。结果表明,桑树桑黄和杨树桑黄均具有很强的抗氧化活性,杨树桑黄的抗氧化活性显著强于桑树桑黄;杨树桑黄醇提物的总黄酮和总多酚含量均高于桑树桑黄醇提物。通过超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF-MS)比较了桑树桑黄和杨树桑黄乙醇提取物成分差异,桑树桑黄中共鉴定出19种多酚类物质,杨树桑黄中除了与桑树桑黄中相同的19种物质,还另外分析出3种多酚类物质。
关键词:
Antioxidant activities and chemical components of ethanol extracts of fruit bodies of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii were compared. DPPH scavenging activity, superoxide anion scavenging activity and β-carotene bleaching assay were used to compare the antioxidant activity. The results showed that both S. sanghuang and S. vaninii had strong antioxidant activity, and the antioxidant activity of S. vaninii was significantly stronger than that of S. sanghuang. The content of total flavonoid and total polyphenol in the ethanol extract of S. vaninii were higher than that of S. sanghuang. Ultra performance liquid chromatography tandem triple quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Triple-TOF-MS) was used to compare the differences of chemical components in the ethanol extracts. Nineteen phenolic compounds were common to S. sanghuang and S. vaninii, and additional three phenolic compounds were identified from S. vaninii.
Keywords:
本文引用格式
吕国英, 宋婷婷, 蔡为明, 张作法.
LV Guo-Ying, SONG Ting-Ting, CAI Wei-Ming, ZHANG Zuo-Fa.
机体受到应激入侵或在特殊生理情况下,产生大量过剩的活性氧自由基,造成机体组织细胞中生物大分子发生变形、交联、断裂等现象,从而造成氧化损伤,引起各种疾病(Durazzo et al. 2019)。为了预防和缓解各类疾病,生物体需要补充一些有效的抗氧化剂,使机体的抗氧化水平达到平衡。人工合成的许多抗氧化剂副作用明显,所以开发天然的植物源抗氧化剂意义深远(Hu et al. 2009)。
桑黄是一类桑黄孔菌属大型珍稀药用木腐真菌的总称。桑黄在我国已有2 000年的应用历史,最早以“桑耳”之名出现在《神农本草经》上。桑黄这一名称最早出现在唐初的《药性论》,在明代的《本草纲目》及其他医书也有记载,并一直沿用至今。除中国古籍记载外,朝鲜医书《乡药集成方》和《东医宝鉴》皆称桑黄如灵丹妙药。多处古籍记载说明了桑黄作用之大,被世人所认可。
桑黄名称及其药用在中国流传千年以上,在日、韩使用也达数百年,但真正的桑黄种类及学名长久以来并没有定论(吴声华等 2016)。有鉴于前期真正的桑黄种类未理清,不同桑黄之间的比较研究更没法开展。直到2012年吴声华博士等通过研究发现真正的桑黄是未曾发表过的新种,分布于中国大陆、日本、韩国以及台湾地区,野外仅生长在桑属植物树干(Wu et al. 2012)。Zhou et al.(2016)通过序列分析及形态特征将桑黄类群重新进行归类,建立桑黄孔菌新属,并命名为Sanghuangporus Sheng H. Wu W. Zhou & Y.C. Dai。目前,桑黄类群包括了13个种,我国发现8个种,广泛分布于寒温带至热带地区,部分种类仅分布于特定区域,具有明显的地域特色,部分种仅寄生在特定宿主植物上(朱琳和崔宝凯 2016)。吴长生(2011)对天然野生桑黄和人工培养桑黄95%乙醇提取物进行了化学成分研究,共分离得到57个化合物,包括4个新苄基二氢黄酮。张俊峰等(2020)比较了桑黄菌丝体和子实体4个萃取相在抗氧化、抗肿瘤与化学成分上存在的差异,提出发酵菌丝体在抗氧化活性方面具有替代子实体的可行性。
桑树桑黄Sanghuangporus sanghuang和杨树桑黄S. vaninii是目前研究和开发最好的两种桑黄。然而外观似桑黄的种类很多,真正的野生桑树桑黄的数量很少,如外观类似的杨树桑黄,在野外的数量约为桑树桑黄的百倍(吴声华等 2016),且市场价格比桑树桑黄低很多。但是到目前为止,野生桑树桑黄和杨树桑黄在抗氧化活性及活性成分的差异方面鲜有系统的研究。本研究对野生桑树桑黄和杨树桑黄提取物抗氧化活性进行比较,并对其活性成分进行系统鉴定,为其后续的开发和研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 桑黄子实体:桑树桑黄和杨树桑黄子实体选用千岛湖野生桑树桑黄和杨树桑黄。并利用ITS序列信息对桑树桑黄和杨树桑黄进行过分子生物学鉴定。经60℃干燥、粉碎后,过120目备用。
1.1.2 主要试剂:福林‐酚试剂(Folin‐Ciocalteu)、芦丁、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、丁基羟基茴香醚(BHA)、邻苯三酚、亚油酸、β-胡萝卜素购自Sigma,其余化学试剂均为国产分析纯或色谱纯。
1.2 提取物的制备
取粉碎好的桑树桑黄和杨树桑黄各50g,加入1 500mL 70%乙醇,超声提取30min,提取结束后,过滤,残渣再加入1 500mL 70%乙醇超声提取一次,合并滤液,真空旋转蒸发浓缩,进一步冷冻干燥,得到提取物。
1.3 活性成分含量测定
1.3.1 多酚含量:根据张梅梅等(2011)的Folin-Ciocalteu方法略加改动,测定多酚含量。以没食子酸浓度为横坐标,波长750nm下吸光值为纵坐标,标准曲线的回归方程为:y=7.7925x+0.0115,相关系数R2=0.9982。
1.3.2 总黄酮含量:根据Zhuang et al.(2018)的方法测定黄酮含量。以芦丁浓度为横坐标,波长510nm下吸光值为纵坐标,标准曲线的回归方程为:y=1.927x+0.117,相关系数R2=0.9935。
1.4 抗氧化活性分析
1.4.1 DPPH自由基清除能力:取2mL(不同浓度)样品液置于10mL离心管中,加入2mL现配的0.1mmol/L的DPPH甲醇溶液,混合均匀后,在室温下置于暗处静置30min,于517nm处测定吸光度(Locatelli et al. 2009)。
1.4.2 超氧自由基清除能力:取4.5mL的缓冲液于10mL具塞试管中,20℃水浴中预热20min后,分别加入不同浓度的提取液1mL和25mmol/L 邻苯三酚溶液0.4mL,摇匀后用蒸馏水稀释至刻度。置于25℃水浴中反应5min,取出后加入8mol/L HCL溶液1mL,终止反应。于299nm处测定吸光度(Li 2012)。
1.4.3 β-胡萝卜素漂白实验:向烧瓶中加入20mg亚油酸,20mg吐温-40,然后加入1mL β-胡萝卜素的氯仿溶液(0.1mg/mL),45℃下旋转真空蒸发器中蒸发掉氯仿液,然后缓慢向半固残渣中加入50mL去离子水,边加边剧烈振摇烧瓶,形成乳浊液,备用。试管中加入0.2mL样品溶液(提取物,BHA),加入5mL乳浊液,摇匀后在470nm下测定吸光度,以不含β-胡萝卜素的乳浊液作为空白对照,试管在50℃水浴中放置,吸光度每15min测定一次,记录至180min(Yuan et al. 2017)。
1.5 UPLC-Triple-TOF/MS定性分析
1.5.1 测定液的制备:桑树桑黄和杨树桑黄提取物各1g溶于30mL 70%甲醇溶液,旋转蒸发除去甲醇后,用等量的乙酸乙酯进行萃取,乙酸乙酯萃取液蒸干后,加入5mL甲醇溶解,进行UPLC-Triple-TOF/MS定性分析。
1.5.2 色谱条件:色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm i.d.,1.7µm); 流动相A为0.1%甲酸溶液,流动相B为0.1%甲酸乙腈,线性梯度洗脱,0min 10% B;2min 20% B;25min 35% B;35min 95% B;37min 95% B;流速为0.3mL/min;进样量:2µL。
1.5.3 质谱条件:UPLC-Triple-TOF 5600+飞行时间液质联用仪:负离子扫描模式;扫描范围:m/z 100-1 500;雾化气(GS1):55psi;雾化气(GS2):55psi;气帘气(CUR):35 psi;离子源温度(TEM):550V(负);离子源电压(IS):-4 500V(负);一级扫描:去簇电压(DP):100V;聚焦电压(CE):10V;二级扫描:使用TOF MS-Product Ion-IDA模式采集质谱数据,CID能量为-20、-40和-60V。
1.6 统计方法
所有计量数据均表示为X±SD,采用SPSS软件进行单因素方差分析及q检验法进行检验,以P<0.05为显著差异。
2 结果与分析
2.1 多酚与黄酮含量
多酚是一类芳香族衍生物的总称,广泛存在于植物和真菌中。它是一种很好的电子供体,通过与自由基或金属离子等发生反应,可以阻断脂质的过氧化作用(Martini et al. 2017)。黄酮作为稳定的自由基清除剂是在自然界中普遍存在的一类化合物(Chen et al. 2016)。
图1
图1
野生桑树桑黄和杨树桑黄提取物中黄酮和多酚的含量
数据均为测定3次的结果,表示为“平均值±标准差”,同一列不同字母代表数值间差异显著(P<0.05)
Fig. 1
Content of flavonoid and polyphenol in extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.
All the data were determined for three times. Means ± standard deviation (n=2) with different letters in the same row are significantly different (P<0.05).
野生桑树桑黄和杨树桑黄子实体经70%乙醇提取,分析可知,桑树桑黄和杨树桑黄提取物中黄酮类含量分别达到了(10.18±0.85)%和(13.58±1.33)%,多酚含量分别达到了(14.62± 1.05)%和(15.38±0.76)%。杨树桑黄中多酚含量略高于桑树桑黄,黄酮含量显著高于桑树桑黄。
2.2 DPPH自由基清除活性
桑树桑黄和杨树桑黄提取液的DPPH自由基清除活性见图2。随着浓度的增加,桑树桑黄和杨树桑黄提取物和抗氧化剂BHA的DPPH自由基清除率先不断增加再趋于平缓。其中杨树桑黄提取物对DPPH自由基的清除率要显著高于桑树桑黄提取物。在浓度达到1.6mg/mL时,杨树桑黄提取物与BHA清除效果相当。抗氧化剂主要通过两种机制发挥作用:作为氢原子供体和作为电子供体。已知酚类物质是优良的氢原子和电子供体,并能形成稳定的自由基中间物,因此酚类物质在抗氧化活性中发挥重要作用。
图2
图2
野生桑树桑黄和杨树桑黄提取物DPPH自由基清除活性比较
数据均为测定3次的结果,表示为“平均值±标准差”,同一列不同字母代表数值间差异显著(P<0.05)
Fig. 2
DPPH scavenging activity of extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.
All the data were determined for three times. Means ± standard deviation (n=2) with different letters in the same row are significantly different (P<0.05).
2.3 超氧阴离子清除能力
不同浓度的桑树桑黄提取物、杨树桑黄提取物和BHA都具有一定的清除超氧阴离子的能力(图3)。在浓度为0.1和0.2mg/mL时,杨树桑黄提取物与桑树桑黄提取物超氧自由基的清除能力不显著。当浓度达到0.4mg/mL时,桑树桑黄提取物、杨树桑黄提取物和BHA对超氧阴离子清除能力差别显著,分别为78.4%、84.1%和99.0%。
图3
图3
野生桑树桑黄和杨树桑黄提取物超氧阴离子自由基清除活性比较
数据均为测定3次的结果,表示为“平均值±标准差”,同一列不同字母代表数值间差异显著(P<0.05)
Fig. 3
Superoxide anion scavenging activity of extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.All the data were determined for three times. Means ± standard deviation (n=2) with different letters in the same row are significantly different (P<0.05).
2.4 β-胡萝卜素漂白实验
β-胡萝卜素、亚油酸共氧化试验中各样品的抑制活性见图4。各样品的吸光度显著下降并最后趋于平缓。在反应的120min内,桑树桑黄提取物、杨树桑黄提取物和BHA的吸光度分别从0.36、0.37和0.39下降到0.15、0.19和0.27。实验结果与其他抗氧化活性评价的结果相似,杨树桑黄提取物的抗氧化活性显著高于桑树桑黄提取物。
图4
图4
桑树桑黄和杨树桑黄提取物β-胡萝卜素漂白活性比较
Fig. 4
β-carotene bleaching assay of extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.
2.5 桑树桑黄和杨树桑黄醇提物的化学组成比较
图5
图5
桑树桑黄和杨树桑黄提取物的液相色谱图
Fig. 5
UPLC of extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.
图6
图6
桑树桑黄和杨树桑黄化合物的化学结构
1:原儿茶酸;2:原儿茶醛;3:Phellbaumin B;4:桑黄素C;5:Hispidin;6:Phelligridimer A isomer;7:骨碎补内酯;8:Phelligrimer A;9:Davallialactone isomer;10:Hypholomine B;11:Hypholomine bisomer;12:桑黄素L;13:纤孔菌素A;14:Phellinstatin;15:桑黄素 E;16:Phellinstatin isomer;17:桑黄素D;18:Phelligridin isomer;19:Inonebulin A;20:Meshimakobonl B;21:桑黄素 H;22:桑黄素 L
Fig. 6
Chemical structures of compounds in the extracts of wild Sanghuangporus sanghuang and S. vaninii.
1: 3,4-dihydroxybenzoic acid; 2: 3,4-dihydroxybenzaldehyde; 3: Phellbaumin B; 4: 4-(3,4-dihydroxyphenyl)-3- buten-2-one; 5: Hispidin; 6: Phelligridimer A isomer; 7: Davallialactone; 8: Phelligrimer A; 9: Davallialactone isomer; 10: Hypholomine B; 11: Hypholomine bisomer; 12: 3,14’-bihispidinyl; 13: Inoscavin A; 14: Phellinstatin; 15: Phelligridin E; 16: Phellinstatin isomer; 17: Phelligridin D; 18: Phelligridin isomer; 19: Inonebulin A; 20: Meshimakobonl B; 21: Phelligridin H; 22: Phelligridin L.
成分1:出峰时间为2.51,[M-H]-为m/z 153.0215,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C7H6O4,根据二级质谱,109等碎片离子,推测结构中存在羧基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为原儿茶酸(3,4-dihydroxybenzoic acid)。
成分2:出峰时间为3.24,[M-H]-为m/z 137.0265,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C7H6O3,根据二级质谱,119、108等碎片离子,推测结构中存在羟基和醛基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为原儿茶醛(3,4-dihydroxybenzaldehyde)。
成分3:出峰时间为4.13,[M-H]-为m/z 423.0704,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C22H16O9,根据二级质谱,379、335等碎片离子,推测结构中存在羧基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为phellibaumin B。该化合物是从暴马丁桑黄中发现的由hispidin衍生的一种多酚类化合物。
成分4:出峰时间为5.11,[M-H]-为m/z 177.0571,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C10H10O3,根据二级质谱,159、135等碎片离子,推测结构中存在羰基和羟基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为桑黄素C(4-(3,4-dihydroxyphenyl)-3- buten-2-one)。该化合物同样拥有邻二酚的母核结构,也具有很强的抗氧化活性。
成分5:出峰时间为5.67,[M-H]-为m/z 245.0455,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C13H10O5,根据二级质谱,201、159等碎片离子,推测结构中存在羰基、羟基等结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为hispidin。
成分6:出峰时间为6.98,[M-H]-为m/z 975.1397,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C52H32O20,根据二级质谱,931等碎片离子,推测结构中存在羧基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为phelligridimer A或其异构体。phelligridimer A是hispidin 衍生物,其有很强的抗氧化作用(Wang et al. 2005)
成分7:出峰时间为7.34,[M-H]-为m/z 463.1016,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C25H20O9,根据二级质谱,405、379、335、135等碎片离子,推测结构中存在苯并乙烯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为骨碎补内酯(davallialactone)。此化合物也是也是hispidin衍生物,其有很强的抗氧化作用(Yang et al. 2013)。
成分8:出峰时间为7.62,[M-H]-为m/z 975.1406,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C52H32O20,根据二级质谱,931等碎片离子,推测结构中存在羧基,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,相对含量判断,推测该化合物为phelligridimer A。
成分9:出峰时间为7.87,[M-H]-为m/z 463.1014,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C25H20O9,根据二级质谱,405、379、335、135等碎片离子,推测结构中存在苯并乙烯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为davallialactone异构体。
成分10:出峰时间为10.66,[M-H]-为m/z 489.0807,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C26H18O10,根据二级质谱,445、403、135等碎片离子,推测结构中存在苯并乙烯和羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为hypholomine B。hypholomine B作为一种多酚类化合物,具有很强的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。
成分11:出峰时间为12.20,[M-H]-为m/z 489.0811,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C26H18O10,根据二级质谱,445、403、135等碎片离子,推测结构中存在苯并乙烯和羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为hypholomine B异构体。
成分12:出峰时间为13.01,[M-H]-为m/z 489.0808,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C26H18O10,根据二级质谱,445、403、135等碎片离子,推测结构中存在苯并乙烯和羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为桑黄素L(3,14’-bihispidinyl)。3,14’-bihispidinyl作为一种hispid的衍生物,具有很强的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。
成分13:出峰时间为13.95,[M-H]-为m/z 461.0866,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C25H18O9,根据二级质谱,417等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为纤孔菌素A(inoscavin A)。
成分14:出峰时间为14.83,[M-H]-为m/z 733.1187,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C39H26O15,根据二级质谱,689、645等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为phellinstatin。Phellinstatin是拥有多个酚羟基的多酚化合物,具有很强的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。
成分15:出峰时间为14.9,[M-H]-为m/z 473.0502,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C25H14O10,根据二级质谱,458、445等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为桑黄素E(phelligridin E)。
成分16:出峰时间为16.02,[M-H]-为m/z 733.1187,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C39H26O15,根据二级质谱,689、645等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为phellinstatin异构体。
成分17:出峰时间为16.31,[M-H]-为m/z 379.0447,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C20H12O8,根据二级质谱,335、307等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为桑黄素D(phelligridin D)。
成分18:出峰时间为16.95,[M-H]-为m/z 379.0450,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C20H12O8,根据二级质谱,335、307等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,推测该化合物为phelligridin D的异构体。
成分19:出峰时间为18.71,[M-H]-为m/z 623.0814,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C33H20O13,根据二级质谱,579等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,根据相对保留时间,推测该化合物为inonobulin A。Inonobulin A是一种拥有多个酚羟基的多酚类化合物。
成分20:出峰时间为20.83,[M-H]-为m/z 363.0502,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C20H12O7,根据二级质谱,335等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,根据相对保留时间,推测该化合物为meshimakobnol B(Nagatsu et al. 2004)。
成分21:出峰时间为27.0,[M-H]-为m/z 621.0665,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C33H18O13,根据二级质谱,577等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,根据相对保留时间,推测该化合物为桑黄素H(phelligridin H)(Zheng et al. 2011)。
成分22:出峰时间为28.28,[M-H]-为m/z 459.0711,根据高分辨质谱结果拟合的分子式为C25H16O9,根据二级质谱,415、373等碎片离子,推测结构中存在羧基或者内酯结构,根据Scifinder和Reaxy数据库检索,根据相对保留时间,推测该化合物为桑黄素L(phelligridin L)(Zheng et al. 2011)。
3 讨论
桑树桑黄只生活在活体桑树上,目前还很难栽培,野生数量也很有限;杨树桑黄野生较多,人工栽培也已经比较成熟,市面上所谓的栽培桑黄子实体,大都是杨树桑黄(吴声华和戴玉成 2020)。
本研究中,桑树桑黄和杨树桑黄子实体选用千岛湖采集的野生桑树桑黄和杨树桑黄,并经过形态学和分子生物学确定。采用DPPH方法,超氧阴离子清除实验和β-胡萝卜素漂白实验对桑树桑黄和杨树桑黄提取物的抗氧化活性进行研究,研究发现桑树桑黄和杨树桑黄均具有很强的抗氧化活性,杨树桑黄的抗氧化活性显著强于桑树桑黄。
桑树桑黄和杨树桑黄提取物的抗氧化活性与其活性成分是分不开的,本研究采用UPLC-Triple-TOF/MS对桑树桑黄和杨树桑黄提取物中的活性成分进行了定性分析。桑树桑黄中共鉴定出19种活性物质,大多数是hispidin的衍生物;而在杨树桑黄提取物中,除了发现的这19种活性物质外,还发现了meshimakobonl B,桑黄素 H和桑黄素 L。这些化合物均为多酚类物质,其中大部分活性物质的抗氧化活性都有报道(Kim et al. 1999;Ei-Sonbaty et al. 2019)。研究发现这些化合物中很多都含有邻苯二酚的母核结构,这些基团是其显著抗氧化活性的物质基础(Jeong et al. 2009)。Hispidin是真菌中常见的具有抗氧化作用的多酚类化合物。以hispidin为关键前体物质合成的衍生物在大型药用真菌中普遍存在,大部分具有较强的抗氧化、抗炎以及抗肿瘤等活性(Park et al. 2004)。
在桑树桑黄和杨树桑黄提取物中鉴定的化合物有多个是hispidin 及其衍生物。因此,这些物质在桑黄提取液的抗氧化活性中起到很重要的作用。黄酮是桑黄的标志性成分之一,已有报道桑黄中的黄酮类化合物有樱花亭、柚皮素、7-甲基圣草素、芫花素和甲基桑黄黄酮等(莫顺燕等 2003;史帧婷和包海鹰 2016),但在本研究中并没有鉴定出。陈万超等(2020)对近5年从桑黄类真菌中分离得到的多酚类化合物及其活性进行了综述,没有典型黄酮类物质被分离鉴定出来。造成这些差异的原因一方面可能在于以前桑黄菌属分类比较混乱,不同菌种次生代谢产物的合成基因簇不同,另一方面也可能是桑树桑黄和杨树桑黄自身生长状态和寄生树种存在差异。
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DOI:10.1016/j.biochi.2019.09.011 URL [本文引用: 1]
Free radical scavenging activity and protective ability of methanolic extract from Duchenea indica against protein oxidation and DNA damage
3,4-Dihydroxybenzaldehyde purified from the barley seeds (Hordeum vulgare) inhibits oxidative DNA damage and apoptosis via its antioxidant activity
DOI:10.1016/j.phymed.2008.09.013
PMID:19022639
[本文引用: 1]
Barley is a major crop worldwide. It has been reported that barley seeds have an effect on scavenging ROS. However, little has been known about the functional role of the barley on the inhibition of DNA damage and apoptosis by ROS. In this study, we purified 3,4-dihydroxybenzaldehyde from the barley with silica gel column chromatography and HPLC and then identified it by GC/MS. And we firstly investigated the inhibitory effects of 3,4-dihydroxybenzaldehyde purified from the barley on oxidative DNA damage and apoptosis induced by H(2)O(2), the major mediator of oxidative stress and a potent mutagen. In antioxidant activity assay such as DPPH radical and hydroxyl radical scavenging assay, Fe(2+) chelating assay, and intracellular ROS scavenging assay by DCF-DA, 3,4-dihydroxybenzaldehyde was found to scavenge DPPH radical, hydroxyl radical and intracellular ROS. Also it chelated Fe(2+). In in vitro oxidative DNA damage assay and the expression level of phospho-H2A.X, it inhibited oxidative DNA damage and its treatment decreased the expression level of phospho-H2A.X. And in oxidative cell death and apoptosis assay via MTT assay and Hoechst 33342 staining, respectively, the treatment of 3,4-dihydroxybenzaldehyde attenuated H(2)O(2)-induced cell death and apoptosis. These results suggest that the barley may exert the inhibitory effect on H(2)O(2)-induced tumor development by blocking H(2)O(2)-induced oxidative DNA damage, cell death and apoptosis.
Antioxidant polyphenols from the mycelial culture of the medicinal fungi Inonotus xeranticus and Phellinus linteus
DOI:10.1111/j.1365-2672.2008.03737.x URL [本文引用: 3]
Cheminform abstract: inoscavin A, a new free radical scavenger from the mushroom Inonotus xeranticus
DOI:10.1016/S0040-4039(99)01406-9 URL [本文引用: 1]
Improved pyrogallol autoxidation method: a reliable and cheap superoxide- scavenging assay suitable for all antioxidants
DOI:10.1021/jf204970r URL [本文引用: 1]
Study of the DPPH scavenging activity: development of a free software for the correct interpretation of data
DOI:10.1016/j.foodchem.2008.10.035 URL [本文引用: 1]
Role of polyphenols and polyphenol-rich foods in the modulation of PON1 activity and expression
DOI:10.1016/j.jnutbio.2017.06.002 URL [本文引用: 1]
Isolation and synthesis of phelligrins A and B
Identification of novel substituted fused aromatic compounds, meshimakohnol A and B, from natural Phellinus linteus fruit body
DOI:10.1016/j.tetlet.2004.05.102 URL [本文引用: 1]
An antioxidant hispidin from the mycelial cultures of Phellinus linteus
DOI:10.1007/BF02980159 URL [本文引用: 1]
Research progress on effective components and efficacy of Phellinus igniarius
Phelligridimer A, a highly oxygenated and unsaturated 26-membered macrocyclic metabolite with antioxidant activity from the fungus Phellinus igniarius
Chemical constituents of the medicinal fungus Phellinus baumaii
Species clarification of the medicinal fungus Sanghuang
Species clarification for the medicinally valuable Sanghuang mushroom
Taxonomy and development prospects of Sanghuang (Sanghuangporus sanghuang)
Davallialactone from mushroom reduced premature senescence and inflammation on glucose oxidative stress in human diploid fibroblast cells
DOI:10.1021/jf401691y URL [本文引用: 1]
Antiproliferative activity of phenylpropanoids isolated from Lagotis brevituba Maxim
DOI:10.1002/ptr.v31.10 URL [本文引用: 1]
Comparison of active secondary metabolites between mycelia and fruiting bodies of Sanghuangporous sanghuang
Optimization on determination of polyphenols from Inonotus obliquus by Folin-Ciocalteu colorimetry
Production of antioxidant and antitumor metabolites by submerged cultures of Inonotus obliquus cocultured with Phellinus punctatus
DOI:10.1007/s00253-010-2846-2 URL [本文引用: 2]
Global diversity and taxonomy of the Inonotus linteus complex (Hymenochaetales, Basidiomycota): Sanghuangporus gen. nov., Tropicoporus excentrodendri and T. guanacastensis gen. et spp. nov., and 17 new combinations
DOI:10.1007/s13225-015-0335-8 URL [本文引用: 1]
Progress on the studies of medicinal mushrooms “sanghuang” group
Determination of total flavonoids in leaves of Paliurus ramosissimus and orthogonal experiment optimization process
桑黄黄酮A和B的分离与合成
利用正相硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱以及反相HPLC等手段从真菌桑黄 中分离得到两个新的二氢黄酮衍生物,经1D NMR,2D NMR和MS等光谱方法鉴定其结 构分别为5,7,4'–三羟基–6–邻羟苄基二氢黄酮和5,7,4'-三羟基–8–邻羟 苄基二氢黄酮,并且对它们进行了合成。
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