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菌物学报, 2021, 40(9): 2376-2389 doi: 10.13346/j.mycosystema.210156

研究论文

灵芝子实体多糖对小鼠急性酒精肝损伤预防的代谢组分析

叶丽云,, 孟国良, 吴龙月, 郝金斌, 程冰, 傅俊生, 吴小平,,*

福建农林大学生命科学学院 福建 福州 350002

Preventive effects of the Ganoderma lingzhi fruit-body polysaccharides on the acute alcoholic injury of mice liver based on metabonomics analysis

YE Li-Yun,, MENG Guo-Liang, WU Long-Yue, HAO Jin-Bin, CHENG Bing, FU Jun-Sheng, WU Xiao-Ping,,*

College of Life Sciences of Fujian Agricultural and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002, China

责任编辑: 韩丽

收稿日期: 2021-04-19   接受日期: 2021-06-4  

基金资助: 国家重点研发计划“中医药现代化研究”重点专项(2019YFC1710501)

Corresponding authors: *E-mail: fjwxp@126.com,ORCID: WU Xiao-Ping (0000-0002-5229-0594)

Received: 2021-04-19   Accepted: 2021-06-4  

Fund supported: National Key Research and Development Program “Research on Modernization of Traditional Chinese Medicine”(2019YFC1710501)

作者简介 About authors

ORCID:YELi-Yun(0000-0001-9142-9627) 。

摘要

灵芝多糖是灵芝的主要药理活性成分之一。本研究通过检测血清指标分析灵芝子实体多糖（Ganoderma lingzhi fruitbody polysaccharides,GLFPS）对小鼠急性酒精性肝损伤的预防作用并结合代谢组学探究作用机制。结果显示,GLFPS显著抑制因酒精作用而升高的小鼠血清中ALT、AST、TG、TC和ADH水平。通过代谢组分析,在模型组与对照组中得到85个差异代谢物,其中三磷酸腺苷（adenosine triphosphate）、L-天门冬氨酸（L-aspartic acid）以及赖氨酸（L-lysine）等在相互作用网络中起重要作用,说明酒精能引起小鼠肝脏腺苷和氨基酸代谢的改变。GLFPS组与模型组有58个差异代谢物,主要包括脂质和有机氧化物,说明GLFPS可以通过调节小鼠肝脏中脂质与有机化合物代谢来预防急性酒精肝损伤。对差异代谢物进行KEGG富集分析发现主要涉及胆碱代谢、甘油磷脂代谢和ABC转运蛋白。GLFPS能够有效缓解这3个代谢通路中因酒精作用发生明显改变的代谢。综上可见,灵芝子实体多糖能够通过调节小鼠胆碱代谢、甘油磷脂代谢以及部分ABC转运蛋白有效预防酒精性肝损伤。

关键词： 灵芝子实体多糖; 血清指标; 差异代谢物; 胆碱代谢; 甘油磷脂代谢; ABC转运蛋白代谢

Abstract

Polysaccharide is one of the main pharmacological active components of Ganoderma lingzhi. The preventive effect of polysaccharides from G. lingzhi fruit-body (GLFPS) on acute alcoholic liver injury in mice was analyzed by detecting serum indexes, and the mechanism of metabonomics was explored. The results showed that GLFPS significantly inhibited the levels of ALT, AST, TG, TC and ADH in serum of mice induced by alcohol. With the help of metabonomics analysis, 85 different metabolites were obtained between the model group and the control group. Among them, adenosine triphosphate, L-aspartic acid, and L-lysine play important roles in the interaction network, indicating that alcohol can cause changes in the metabolism of adenosine and amino acids in the liver of mice. There were 58 different metabolites between the GLFPS treated group and the model group, mainly including lipids and organic oxygen. KEGG enrichment analysis of different metabolites showed that they were involved in choline metabolism, glycerophospholipid metabolism, and ABC transporters. GLFPS can effectively relieve hurt of these three metabolic pathways significantly changed by alcohol. In conclusion, GLFPS effectively prevent alcoholic liver injury by regulating the metabolism of choline, glycerophospholipids, and some ABC transporters in mice.

Keywords： Ganoderma lingzhi fruit-body polysaccharides (GLFPS); serum index; different metabolites; choline metabolism; glycerophospholipids metabolism; ABC transporters

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本文引用格式

叶丽云, 孟国良, 吴龙月, 郝金斌, 程冰, 傅俊生, 吴小平. 灵芝子实体多糖对小鼠急性酒精肝损伤预防的代谢组分析[J]. 菌物学报, 2021, 40(9): 2376-2389 doi:10.13346/j.mycosystema.210156

YE Li-Yun, MENG Guo-Liang, WU Long-Yue, HAO Jin-Bin, CHENG Bing, FU Jun-Sheng, WU Xiao-Ping. Preventive effects of the Ganoderma lingzhi fruit-body polysaccharides on the acute alcoholic injury of mice liver based on metabonomics analysis[J]. Mycosystema, 2021, 40(9): 2376-2389 doi:10.13346/j.mycosystema.210156

灵芝多糖（Ganoderma lingzhi polysaceharides）包括葡聚糖和杂多糖,杂多糖主链主要以葡萄糖、半乳糖和甘露糖为主,支链中含岩藻糖、木糖和阿拉伯糖等糖单元（张汇等 2020）。大部分的灵芝多糖有分支,部分能与蛋白或多肽结合形成糖蛋白或蛋白聚糖结构（Ye et al. 2010）。灵芝多糖是灵芝的主要药理活性成分之一,具有广泛的药理活性。灵芝多糖通过改善辐射模型小鼠胸腺中L-谷氨酸、牛磺酸、磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱等来发挥辐射防护作用（迪丽索耶尔·亚勒坤木等 2020）;通过对免疫细胞综合作用而产生强大的免疫调节功能（林志彬 2002）;通过抑制炎症因子活化,改善肾功能,从而对糖尿病肾病具有显著疗效（马静等 2019）。唐岚等（2020）也指出在使用紫杉醇治疗4T1小鼠乳腺癌时,联合应用树舌灵芝多糖温敏凝胶进行瘤内注射,可以提高治疗效果,降低化疗副作用。此外,灵芝多糖还具有抗衰老与氧化、调节血脂、提高机体耐缺氧能力等作用（Xu et al. 2009;张瑞婷等 2018）。

酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）是一种由于长期大量饮酒所导致的肝脏损害性病变（谈启军等 2019）。中国酒文化源远流长,患ALD的危险性随着每年酒精消费量的不断增长而升高（贠建蔚和苌新明 2012）。因此,具有良好的保肝活性天然产物的挖掘是酒精性肝病的预防和治疗研究的重要方向之一。目前已有大量的报道指出灵芝多糖具有良好的保肝护肝作用。Zhu et al.（2016）发现灵芝多糖可增加肝糖原水平并通过短链脂肪酸排泄及抗氧化活性对2型糖尿病大鼠的肝功能起到有益作用。Chung et al.（2017）的研究结果表明灵芝多糖在乙醇诱导的小鼠中表现出强抗氧化活性,能够抑制酒精诱导的脂肪性肝损伤。孙艳辉和张宏波（2020）指出灵芝多糖可抑制急性酒精性肝损伤小鼠炎性反应及肝脏脂肪沉积,有效缓解肝组织损伤,恢复其肝功能。但是多糖对肝脏保护具体机制尚不清楚,鲜有利用代谢组学的方式研究灵芝多糖对酒精性肝损伤小鼠代谢的改善作用。本研究以酒精损伤小鼠肝脏建立急性肝损伤模型,通过血清多项指标检测分析灵芝子实体多糖对小鼠急性酒精性肝损伤的预防作用,结合代谢组学探究小鼠代谢网络的变化与可能的作用机制,为天然保肝药物或保肝保健品的挖掘提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 供试材料

灵芝102来自福建农林大学生命科学学院菌种保藏中心;试验小鼠由吴氏实验动物在线提供（ http://www.fzzmsoft.com/xieli/）,全为昆明种的雄性小鼠,体重为18-22g。

1.2 多糖制备

采用热水浸提法提取灵芝粗多糖（Ye et al. 2018）。用Sevage溶液（氯仿:正丁醇=4:1）除去粗多糖中的蛋白杂质,将多糖溶液装入透析袋用流水透析2d除去多糖中的小分子杂质。透析后将多糖溶液冻干,得到灵芝子实体多糖（G. lingzhi fruitbody polysaceharides,GLFPS）。

1.3 小鼠分组及模型建立

饲养房通风良好,照明与黑暗各12h,温度22℃。每3d进行一次常规消毒,及时更换垫料、饮水瓶和笼子（吕超等 2019）。将40只小鼠随机分为4组,包括空白组、模型组、GLFPS组（200mg/kg灵芝子实体多糖）和阳性组（300mg/kg联苯双酯）,每组10只。适应性喂养一周后,用灌胃方式每天定时将等量的蒸馏水灌给空白组和模型组小鼠,GLFPS组和阳性组小鼠每天分别定时灌胃200mg/kg GLFPS和300mg/kg联苯双酯。连续处理一周,整个实验中保持正常进食和饮水（张琪等 2011）。每天20点禁食,第2天定时空腹灌胃再喂饲料,每2d定时称量体重。在最后一次灌药4h后,空白组按12mL/kg的比例灌蒸馏水,其他4组用50%的酒精按相同比例对小鼠灌胃,灌酒后12h内禁食不禁水。

1.4 血清AST、ALT、TG、TC和ADH生化指标测定

禁食结束后记录小鼠体重,用手术钳取下小鼠眼球并将血液收集到含抗凝血剂的试管中,在3 000r/min、4℃参数的高速离心机中离心10min,然后小心吸取上清于新试管中,将含样本的试管暂存冰盒中,待全部样品取完后将样品放入-4℃冰箱存储（梁园等 2014）。使用南京建成有限公司的天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（微板法）、谷丙转氨酶（ALT）试剂盒（微板法）、甘油三酯（TG）测定试剂盒、总胆固醇（TC）测定试剂盒和乙醇脱氢酶（ADH）测定试剂盒（紫外比色法）检测血清中的AST、ALT、TG、TC和ADH（郝金斌等 2020）。

1.5 代谢物检测

代谢物检测参考文鑫（2019）的方法。称量约80mg肝组织加入200μL水匀浆涡漩60s。用体积比为1:1的甲醇乙腈溶液800μL涡漩60s。经2次的低温超声30min后,放入-20℃冰箱1h沉淀蛋白。4℃、14 000r/min离心20min,取上清进行冷冻干燥,-80℃保存。用Agilent 1290 Infinity LC超高效液相色谱系统（UHPLC）HILIC色谱柱对样品进行分离;流动相A由水、25mmol/L乙酸铵和25mmol/L氨水组成,流动相B为乙腈,梯度洗脱程序见表1。设置柱温25℃,流速0.3mL/min,样品置于4℃自动进样器中。采用随机顺序进行样本的连续分析来避免仪器检测信号波动造成的影响。用TripleTOF 5600质谱仪（AB SCIEX）对分离后的样品进行质谱分析,峰对齐、保留时间校正和提取峰面积采用XCMS程序进行。

表1   梯度洗脱程序

Table 1  Gradient elution procedure

时间
Time (min)		B相浓度
Concentration of phase B (%)
0-195
1-1495→65
14-1665→40
16-1840
18-18.140→95
18.1-2395

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1.6 代谢物分析

采用精确质量数匹配和二级谱图来鉴定代谢物结构（杨秀娟等 2018）。数据经Pareto-scaling预处理后,用正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）进行统计分析。用软件Metaboanalyst 5.0以条件VIP>1和P<0.05筛选显著性差异的代谢物并分析代谢物相互作用（ http://www.metaboanalyst.ca/）（张晓波等 2016;Chong et al. 2018）。基于KEGG富集分析构建代谢途径（ http://www.genome. jp/kegg/pathway.html）。

1.7 数据处理

利用数据软件SPSS 22.0对结果做统计分析,利用单因素方差分析并比较组间均值的差异,检验水准以α=0.05,P<0.05说明数据之间有显著差异,P<0.01说明数据之间存在极显著差异,P>0.05则代表无统计学意义。综合使用数据软件SPSS 22.0和GraphPad Prism 6.01绘制图表。

2 结果与分析

2.1 灵芝子实体多糖对急性酒精性肝损伤小鼠体重的影响

一般药物达一定剂量后容易对小鼠产生毒害甚至致死作用。本研究中小鼠毛色光亮,大小便正常,小鼠体重的变化见表2。7d内不同处理组间的小鼠体重并无显著差异,无死亡,这说明试验所用剂量灵芝子实体多糖与联苯双酯对小鼠无毒害作用。

表2   灵芝子实体多糖对急性酒精性肝损伤小鼠体重的影响

Table 2  Effects of Ganoderma lingzhi fruit-body polysaccharides (GLFPS) on body weight of mice with acute alcoholic liver injury

组别
Groups		第1天
First day (g)		第3天
Third day (g)		第5天
Fifth day (g)		第7天
Seventh day (g)
空白组Blank control (CK)25.08±2.1826.58±2.5926.70±2.9428.48±3.16
模型组 Model group25.80±2.1126.65±2.1227.30±2.4128.40±2.92
GLFPS组 GLFPS-treated group25.78±2.1526.85±1.5927.35±4.0828.33±1.12
阳性对照组 Positive control25.84±2.4926.65±2.1226.82±2.4527.05±3.03

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2.2 灵芝子实体多糖对急性酒精性肝损伤小鼠血清中AST、ALT、TG、TC和ADH的影响

血清中AST、ALT、TG、TC和ADH水平是判断肝脏机能的常用手段,各组中试验小鼠血清检测结果见图1。模型组与空白组相比,血清中ALT和AST含量分别提高了98.9%和55.65%,提示乙醇会导致小鼠血清中ALT和AST含量极显著上升（P<0.01）造成肝损伤,说明此次试验的急性酒精性肝损伤模型造模成功。GLFPS组的ALT和AST含量分别比模型组降低25.58%和33.66%,表明GLFPS能够一定程度减轻急性酒精灌胃所造成的不良影响。与空白组对比,急性酒精性肝损伤会使模型组血清中TG、TC和ADH含量极显著升高（P<0.01）,说明酒精会引起小鼠脂质代谢功能紊乱,造成脂质堆积。与模型组相比,GLFPS组的TG、TC和ADH含量显著降低（P<0.05）,表明灵芝子实体多糖可能加快甘油三酯代谢以减少脂肪累积,增加乙醇脱氢酶活性来加快乙醇代谢,从而减轻酒精对细胞损伤,达到保肝护肝的效用。

图1

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图1   小鼠血清AST、ALT、TG、TC和ADH水平

小写字母a,b,c表示在0.05水平上差异的显著性. 下同

Fig. 1   Levels of AST, ALT, TG, TC, and ADH in serum of mice.

Small letters a, b and c indicate the significance of the difference at the level of 0.05. The same below.


2.3 代谢组数据可靠度分析

检测不同处理组中代谢物,用OPLS-DA来衡量各组代谢特征差异情况（图2）。空白组（CK）与模型组（model group）中样品被t1分成两个不同区域,同样t1将模型组和灵芝子实体多糖组（GLFPS）区分开,且各组内7个样品的分布相对集中,表明所测代谢数据组内重复性较好,不同组间差异明显,代谢组数据可靠度高。

图2

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图2   样本OPLS-DA统计分析

Fig. 2   OPLS-DA statistical analysis of samples.


2.4 差异代谢物分析

以VIP>1、P<0.05为条件筛选显著差异的代谢物,在Model vs CK中筛选到符合条件代谢物85个,主要包括有机酸和脂质。这些代谢物的相互作用网络复杂多样,其中三磷酸腺苷（adenosine triphosphate）、L-天门冬氨酸（L-aspartic acid）以及赖氨酸（L-lysine）等节点度最高,在这个网络中起着重要作用（图3A,3B）,说明酒精能引起小鼠肝脏代谢的改变,尤其是部分氨基酸的改变。在GLFPS vs Model 中有58个差异代谢物,涉及脂质和有机氧化物。代谢物相互作用网络比Model vs CK简单,腺苷（adenosine）、腺嘌呤（adenine）和棕榈酸（palmitic acid）是核心代谢物（图3A,3C）,说明灵芝子实体多糖可以通过调节小鼠肝脏中脂质与有机化合物代谢来预防急性酒精性肝损伤。

图3

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图3   差异代谢物

A：差异代谢物数量;B：Model vs CK中差异代谢物分类与相互作用网络图;C：GLFPS vs Model中差异代谢物分类与相互作用网络图

Fig. 3   Differential metabolites.

A: The number of differential metabolites; B: Interaction network of different metabolites in Model vs CK; C: Interaction network of different metabolites in GLFPS vs Model.


2.5 差异代谢物KEGG富集分析

对筛选出的差异代谢物进行KEGG富集分析,Model vs CK的富集结果表明,差异代谢物主要富集在ABC转运蛋白（ABC transporter）、胆碱代谢（choline metabolism）、蛋白质消化吸收（protein digestion and absorption）以及甘油磷脂代谢（glyceropholipid metabolism）等通路（图4A）。GLFPS vs Model的差异代谢物富集的通路包括胆碱代谢、半乳糖代谢（galactose metabolism）、甘油磷脂代谢和ABC转运蛋白（图4B）。由此可见,胆碱代谢、甘油磷脂代谢和ABC转运蛋白是两组中共有的代谢通路,是灵芝子实体多糖对急性酒精性肝损伤小鼠预防作用机制研究的重点。

图4

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图4   差异代谢物KEGG富集分析

A：Model vs CK;B：GLFPS vs Model

Fig. 4   KEGG enrichment analysis of differential metabolites.

A: Model vs CK; B: GLFPS vs Model.


2.6 灵芝子实体多糖预防急性酒精性肝损伤小鼠代谢响应通路分析

比较不同处理组ABC转运蛋白代谢通路发现,与对照组相比,在模型组中麦芽三糖（maltotriose）、L-亮氨酸（L-leucine）、DL-苯丙氨酸（DL-phenylalanine）、L-丝氨酸（L-serine）、L-组氨酸（L-histidine）代谢水平显著降低,L-谷氨酰胺（L-glutamine）代谢水平显著升高,这些因酒精作用发生改变的代谢水平在GLFPS组中得到了缓解（表3）。根据代谢组中差异代谢物的变化情况,构建GLFPS对酒精性肝损伤小鼠胆碱代谢与甘油磷脂代谢调节作用通路（图5）。在所构建的通路中胆碱代谢是甘油磷脂代谢的主要组成部分。除磷酸胆碱（phosphatecholine）与CDP乙醇胺（CDP-ethanolamine）外,因酒精作用在模型组中上升或下降的代谢物在GLFPS组得到了不同程度的缓解,其中胆碱（choline）、磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine）和三乙醇胺（triethanolamine）在多糖组的代谢水平恢复的与对照组接近。综上,灵芝子实体多糖能够减缓酒精对小鼠造成的急性肝损伤,胆碱代谢、甘油磷脂代谢和ABC转运蛋白在其中发挥重要作用。

表3   灵芝子实体多糖对急性酒精性肝损伤小鼠ABC转运蛋白通路涉及代谢物的影响

Table 3  Effects of GLFPS on metabolite of ABC transporter metabolic pathways in acute alcoholic liver injury of mice

代谢物
Metabolite		响应值
Response value
KEGG IDNameCKModelGLFPS
C01835Maltotriose37174.68 b24173.77 c43982.08 a
C00123L-leucine1214910.54 a1052217.65 c1125710.98 b
C00135L-histidine194140.50 a120521.23 c152386.69 b
C00064L-glutamine239717.90 b303821.90 a192075.09 c
C00079DL-phenylalanine1031842.73 a716772.57 c857908.35 b
C00065L-serine108637.04 a84408.24 c93428.46 b

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图5

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图5   灵芝子实体多糖预防急性酒精性肝损伤小鼠胆碱代谢与甘油磷脂代谢通路影响

Fig. 5   Effects of GLFPS on choline metabolism and glyceropholipid metabolism in acute alcoholic liver injury of mice.


3 讨论

肝脏机能判定的常用手段就是检测血液中ALT和AST水平,肝脏、心脏、肾脏、骨骼肌、脑和红细胞中都含有AST;ALT则大量储存于细胞浆之中。当细胞受到损伤时,ALT会先从细胞中流出,当细胞受损程度变大,影响到线粒体时,AST才会被释放到组织液中。肝脏疾病均能导致ALT不同水平的增加,因而ALT成为判断肝脏受损程度的灵敏指标（Dong et al. 2016）。当肝脏脂肪代谢出现能力障碍时血清中TC和TG两种代谢物含量会升高（Reddy & Rao 2006）。ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常（卓孝福1998）。本研究中模型组小鼠血清中ALT、AST、TG、TC和ADH水平显著高于对照组、灵芝子实体多糖组和阳性组,表明灵芝子实体多糖能够有效减轻急性酒精造成的肝损伤。

代谢组分析对生物体内广谱代谢产物进行分析,明确不同状态下代谢产物的变化,研究生命体由各种不同因素产生的体内代谢物水平的多元动态反应（李鳌等 2020）。代谢组学研究经过快速的技术进步,已广泛应用于生命科学各个领域。本研究利用代谢组学手段,比较各处理组小鼠肝脏代谢物的差异,分析GLFPS对小鼠急性肝损伤的作用机制。结果显示在模型组与对照组中得到85个差异代谢物相互作用中三磷酸腺苷、L-天门冬氨酸以及赖氨酸起主要作用。在GLFPS组与模型组有58个差异代谢物,以腺苷、腺嘌呤和棕榈酸为核心代谢物。可见GLFPS可以通过调节小鼠肝脏中脂质与有机化合物代谢来预防急性酒精性肝损伤。这与一些物质已报道保护酒精性肝损伤作用机制相似。赵云霞等（2014）的研究指出鸡枞菌多糖对小鼠酒精性肝损伤保护作用机制可能是增强脂肪酸代谢,从而保护细胞膜,促进细胞的再生和修复;杨梦等（2020）推测草果、菱角壳水提混合液保护肝脏免受急性酒精性损伤的机制与脂质对氧化应激的抵抗能力有关;漆乐媛等（2018）指出栀子油对酒精所致小鼠急性肝损伤保护作用可能与增强肝组织脂质代谢水平相关。

对差异代谢物进行KEGG富集分析发现主要涉及代谢通路包括胆碱代谢、甘油磷脂代谢和ABC转运蛋白。短期内大量酒精摄入会导致严重的肝脏损害,容易形成酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver,AFL）。胆碱是一种必需的营养素,对脂肪有亲合力,能够促进脂肪以磷脂的形式由肝脏通过血液输送出去,也可以改善脂肪酸本身在肝脏中的利用,防止脂肪在肝脏里的异常积聚,因此,血液中胆碱含量低往往与肝脏脂肪变性和肝功能不全有关（Zeisel et al. 1991）。胆碱也常被用于养殖业预防脂肪肝（周萌等 2007;王斯佳等 2012;王敏等 2014）。Tuma et al.（1973）的研究也指出乙醇代谢与肝脏胆碱氧化之间存在潜在的相互关系,乙醇代谢会刺激胆碱的氧化降解。Li et al.（2011）的研究表明磷脂酰胆碱水平在酒精肝损伤小鼠中显著升高。早期Roberti et al.（1974）研究发现急性乙醇摄入影响大鼠肝脏胆碱代谢。甘油磷脂是机体内含量最多的一类磷脂,与许多代谢类疾病相关,而胆碱代谢是甘油磷脂代谢的一部分。在本研究中发现用酒精灌胃的小鼠肝脏的胆碱代谢与甘油磷脂代谢通路上的代谢水平发生明显的变化,模型组中因酒精作用上调或下调的代谢水平在灵芝组得到了有效的减缓,这说明GLFPS能够通过调节小鼠胆碱代谢与甘油磷脂代谢有效预防酒精性肝损伤。ABC转运蛋白超家族是一组跨膜蛋白,能够进行多种分子的跨膜转运,参与药物和内外源毒素的吸收,行使解毒和防御保护的作用（王华丙等 2007;马云芳等 2008）。本研究发现ABC转运蛋白代谢通路中麦芽三糖和部分氨基酸代谢水平在模型组明显升高或下降,这些改变在GLFPS组中得到了有效缓解,表明ABC转运蛋白部分代谢通路在GLFPS预防酒精性肝损伤也起了重要作用。GLFPS能够通过调节小鼠胆碱代谢、甘油磷脂代谢以及部分ABC转运蛋白代谢有效预防酒精性肝损伤。与本研究中灵芝子实体多糖作用的通路不同,南瑛等（2019）的研究表示绞股蓝皂苷通过激活Nrf2/NF-κB通路有效地保护小鼠急性酒精性肝损伤;童垣皓等（2018）指出四联活菌制剂Bornlisy对小鼠酒精性肝损伤的保护作用可能是通过选择性增强PPARα通路来实现;王昱（2018）发现油橄榄叶提取物对酒精性肝损伤预防作用机制可能是通过调控TGF-β1通路。可见,不同物质对小鼠酒精性肝损伤的作用机制不尽相同。

参考文献

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Choline is required to make essential membrane phospholipids. It is a precursor for the biosynthesis of the neurotransmitter acetylcholine and also is an important source of labile methyl groups. Mammals fed a choline-deficient diet develop liver dysfunction; however, choline is not considered an essential nutrient in humans. Healthy male volunteers were hospitalized and fed a semisynthetic diet devoid of choline supplemented with 500 mg/day choline for 1 wk. Subjects were randomly divided into two groups, one that continued to receive choline (control), and the other that received no choline (deficient) for three additional wk. During the 5th wk of the study all subjects received choline. The semisynthetic diet contained adequate, but no excess, methionine. In the choline-deficient group, plasma choline and phosphatidylcholine concentrations decreased an average of 30% during the 3-wk period when a choline-deficient diet was ingested; plasma and erthrocyte phosphatidylcholine decreased 15%; no such changes occurred in the control group. In the choline-deficient group, serum alanine aminotransferase activity increased steadily from a mean of 0.42 mukat/liter to a mean of 0.62 mukat/liter during the 3-wk period when a choline-deficient diet was ingested; no such change occurred in the control group. Other tests of liver and renal function were unchanged in both groups during the study. Serum cholesterol decreased an average of 15% in the deficient group and did not change in the control group. Healthy humans consuming a choline-deficient diet for 3 wk had depleted stores of choline in tissues and developed signs of incipient liver dysfunction. Our observations support the conclusion and choline is an essential nutrient for humans when excess methionine and folate are not available in the diet.

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