冰草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

doi:10.11733/j.issn.1007-0435.2009.03.017

›› 2009, Vol. 17 ›› Issue (3): 354-357.DOI: 10.11733/j.issn.1007-0435.2009.03.017

冰草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

王方¹, 袁庆华^1,2

1. 兰州大学草地农业科技学院, 兰州, 730020;
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京, 100193

收稿日期:2008-11-09 修回日期:2009-03-11 出版日期:2009-06-15 发布日期:2009-06-15
通讯作者: 袁庆华,E-mail:yuanqinghua@hotmail.com
作者简介:王方(1983- ),女,汉族,甘肃兰州人,硕士研究生,研究方向为牧草种质资源,E-mail:wfcayenne@163.com
基金资助:
国家科技支撑项目(2008BABD3B01);基本科研业务费专项(YWF-TD-3)

Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Agropyron cristatum(L.) Gaertn.

WANG Fang¹, YUAN Qing-hua^1,2

1. College of Pastoral Agriculture Science and Technology, Lanzhou University, Lanzhou, Gansu Province 730020, China;
2. Insfitute of Animal Science, CAAS, Beijing 100193, china

Received:2008-11-09 Revised:2009-03-11 Online:2009-06-15 Published:2009-06-15

摘要/Abstract

摘要： 为进一步开展冰草属植物种质资源遗传多样性研究,寻找可用于冰草(Agropyron cristatum(L.)Gaertn.)的ISSR-PCR最适反应体系并建立与优化,具有重要的意义。通过优化影响ISSR-PCR体系的主要参数,最终确定在20μL体系中各反应物的最适含量为:40 ng模板DNA,0.2 mmol·L^-1dNTP,0.5μmol·L^-1ISSR引物,1 UTaq DNA聚合酶,2μL10×PCR Buffer,2.5 mmol·L^-1MgCl₂;引物815号的最适退火温度为50℃。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行冰草属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。

关键词: 冰草, ISSR, PCR反应体系, 优化

Abstract: It is necessary to establish and optimize the ISSR-PCR reaction system for genetic diversity study of Agropyron cristatum(L.) Gaertn.Results show that the optimum concentration of seven reactants in 20 μL reaction mixture were as follows: 40 ng genomic DNA,0.2 mmol·L^-1 dNTP,0.5 μmol·L^-1 ISSR primer,1 U Taq DNA polymerase,2 μL 10× PCR buffer,2.5 mmol·L^-1 MgCl₂.The suitable annealing temperature of primer 815 was 50℃.This reaction system would provide the basis for the diversity analysis of A.cristatum with ISSR markers.

Key words: Wheatgrass, ISSR, PCR reaction system, Optimization

中图分类号:

S812
Q943

王方, 袁庆华. 冰草ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. , 2009, 17(3): 354-357.

WANG Fang, YUAN Qing-hua. Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Agropyron cristatum(L.) Gaertn.[J]. , 2009, 17(3): 354-357.

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